Caracterización de los tipos capsulares de Pasteurella multocida en exudado faríngeo de bovinos productores de carne clínicamente sanos en el estado de Querétaro / Characterization of capsular types of Pasteurella multocida isolated from clinically healthy beef cattle pharyngeal exudate in the state of Querétaro

El objetivo del presente estudio fue identificar y caracterizar los tipos capsulares de P. multocida en exudado faríngeo en bovinos destinados a la producción de carne en el estado de Querétaro. Se obtuvieron, mediante hisopo, 227 muestras de exudado faríngeo de animales clínicamente sanos en una planta de sacrificio ubicada en el municipio de Ezequiel Montes, Querétaro. Las muestras se sembraron en agar sangre y se incubaron a 37°C por 24 h en aerobiosis. Las cepas aisladas fueron identificadas mediante características morfológicas, pruebas bioquímicas convencionales y el microsistema comercial API 20NE. La tipificación de los grupos capsulares A y D se realizó por medio de una PCR múltiple para la amplificación de los genes hyaD-hyaC y dcbF, respectivamente. De acuerdo con los valores establecidos por el software API WEB, se logró la identificación de 14.09% (32/227) de cepas de P. multocida, que mostraron 96% de identidad y una tipicidad de 1 a P. multocida. Por medio de la PCR múltiple se logró la amplificación de los genes hyaD-hyaC correspondientes al grupo capsular A en el 100% (32/32) de las cepas identificadas previamente como P. multocida. No existen datos similares en México sobre la identificación y caracterización de P. multocida en bovinos destinados a la producción de carne. Con los resultados obtenidos se corrobora que, de manera similar a otros países de Europa y América, en México el grupo capsular predominante de P. multocida es el A.

The objective of the present study was to identify and characterize capsular types of P. multocida isolated from beef cattle pharyngeal exudate in the state of Querétaro. Two hundred and twenty seven pharyngeal exudate swab samples from clinically healthy animals in a slaughterhouse in the municipality of Ezequiel Montes, Querétaro were obtained. Samples were seeded in blood agar and incubated at 37°C for 24 h under aerobiosis. Strains were identified through morphological characteristics, conventional biochemical tests and commercial API 20NE Micro-System. Capsular typing of groups A and D was performed by a multiplex PCR for amplification of genes hyaD-hyaC and dcbF, respectively. According to the values established by API WEB software, it was possible to identify 14.09% (32/227) of P. multocida strains, which showed an identification percentage of 96% and a typicality of 1 to P. multocida. By multiplex PCR, the amplification of genes hyaD-hyaC, correspondent to capsular group A in 100% (32/32) of the strains previously identified as P. multocida, was achieved. There are no similar data in Mexico on the identification and characterization of P. multocida in beef cattle. With the results obtained it is confirmed that, in a similar way with other countries of Europe and America, capsular type A of P. multocida is predominant in Mexico.

Frecuencia de aislamientos de Mannheimia haemolytica y Pasteurella multocida en becerras con signos clínicos de enfermedad respiratoria, en un complejo lechero del estado de Hidalgo, México / Frequency of Mannheimia haemolytica and Pasteurella multocida isolates obtained from calves with clinical signs of respiratory tract disease from a dairy complex in the state of Hidalgo, Mexico

Mannheimia hemolytica (Mh) and Pasteurella multocida (Pm) strains obtained from bovine nasal discharge of clinically affected by respiratory tract disease calves, were isolated and characterized to estimate the isolation frequency in a dairy complex in the state of Hidalgo, Mexico, over a period of five months by means of a transsectional descriptive study. Strains were isolated and typified through selective media and biochemical tests. Chi-square or Fisher's statistical tests were applied, as well as odds ratio calculation and logistic regression analysis to evaluate the association of some variables on Mh and Pm isolation. Of the 239 calves younger than 1 year of age researched, in 84 (35.14%) Mh or Pm was isolated, 67 (28.03%) of them with Mh and 17 (7.11%) with Pm, in eight calves (3.10%) both microorganisms were isolated. Potential risk factors such as housing, treatment and vaccination were evaluated. The frequency of Mh isolates was higher than the Pm in calf accommodations individual housing or in group housing (P ≤ 0.05); similarly, the frequency of Mh and Pm isolates together were higher in not vaccinated against infectious bovine rhinotracheitis (OR = 2.93, P ≤ 0.05), bovine viral diarrhea (OR = 4.26, P ≤ 0.05), parainfluenza 3 (OR = 2.68, P ≤ 0.05), bovine syncytial virus (OR = 2.36, P ≤ 0.05) and mannheimiosis (OR = 1.97, P ≤ 0.05). Calves housed in the stables and no vaccination against bovine viral diarrhea, were the variables that remained in the logistic regression model. Mh got the highest isolation rate in calf accommodations individual housing or in group housing, as well as in outdoors housing.

Se determinó la frecuencia de Mannheimia haemolytica (Mh) y Pasteurella multocida (Pm) obtenidas de exudado nasal de becerras afectadas por enfermedad respiratoria, en un complejo lechero del estado de Hidalgo, México, evaluadas durante 5 meses en un estudio descriptivo transversal. El aislamiento e identificación se hizo mediante procedimientos selectivos y pruebas bioquímicas. Se evaluó la asociación de algunas variables con el aislamiento de Mh y Pm, mediante Ji cuadrada o Fisher, el cálculo de la razón de momios y el análisis de regresión logística. De 239 becerras menores de un año, estudiadas, en 84 (35.14%) se aisló Mh o Pm, de ellas, 67 (28.03%) con Mh y 17 (7.11%) con Pm; en 8 becerras (3.10%) se aislaron ambos microorganismos. Se evaluaron posibles factores de riesgo: alojamiento, tratamiento y vacunación. La frecuencia de aislamientos de Mh fue mayor que la de Pm en becerras alojadas en becerreras o en corrales (P ≤ 0.05), o que estaban en becerreras a la intemperie (P ≤ 0.05), similarmente, la frecuencia de Mh y Pm juntas, fue mayor en becerras no vacunadas contra rinotraqueitis infecciosa bovina (RM = 2.93, P ≤ 0.05), diarrea viral bovina (RM = 4.26, P ≤ 0.05), parainfluenza 3PI3 (RM = 2.68, P ≤ 0.05), virus respiratorio sincitial bovino (RM = 2.36, P ≤ 0.05) y mannheimiosis (RM = 1.97, P ≤ 0.05). Las variables que permanecieron en el modelo de regresión fueron alojar las becerras en los establos y la no vacunación contra diarrea viral bovina. Mh presentó la mayor tasa de aislamientos en becerras alojadas tanto en becerreras individuales como en corrales o a la intemperie.

Caracterización fenotípica y molecular de cepas de Pasteurella multocida aisladas de exudado nasal de bovinos, en dos cuencas lecheras de México / Phenotypic and molecular strain characterization of Pasteurella multocida isolated from cattle nasal exudate from two dairy complexes in Mexico

Two hundred and fifty strains of P. multocida isolated from nasal exudate were obtained, 182 clinically healthy bovine strains and 68 clinically ill with pneumonia bovine strains, from two dairy complexes, one in the Tizayuca region of Hidalgo state (n = 81), and another in the Region Lagunera of the states of Coahuila and Durango (n = 169), Mexico. Strains were identifed by conventional biochemical tests and API 20NE commercial system. Capsular typing was performed by testing hyauloronidase and acrifavine, as well as by a multiplex PCR for amplification of genes hyaC-hyaD and dcbF. The overall results of hyaluronidase by the test showed that 90.4% (226/250) of the strains were capsular type A and through the acrifavine test 9.6% (24/250) was capsular type D. Using the multiplex PCR, 92% (230/250) was capsular type A and 8% (20/250) was capsular type D. The comparison of results between biochemical tests and PCR are consistent in identifying strains of capsular type A but not with the capsular type D. It was possible to confrm that capsular type A of P. multocida is predominat in Mexico.

Se obtuvieron 250 cepas de P. multocida aisladas de exudado nasal, 182 cepas de bovinos clínicamente sanos y 68 cepas de bovinos clínicamente enfermos de neumonía, de dos complejos lecheros, uno en la región de Tizayuca estado de Hidalgo (n = 81), y otro en la Región Lagunera de los estados de Coahuila y Durango (n = 169), México. Las cepas fueron identificadas mediante pruebas bioquímicas convencionales y el sistema comercial API 20NE. La tipificación capsular se realizó por medio de las pruebas de hiauloronidasa y acrifavina, así como por medio de una PCR múltiple para la amplificación de los genes hyaD-hyaC y dcbF. Los resultados globales mediante la prueba de hialuronidasa mostraron que 90.4% (226/250) de las cepas fueron del tipo capsular A y por medio de la prueba de acrifavina, 9.6% (24/250) fue del tipo capsular D. Por medio de la PCR múltiple, 92% (230/250) fue tipo capsular A y 8% (20/250) fue tipo capsular D. La comparación de los resultados entre las pruebas bioquímicas y la técnica de PCR concuerdan en la identificación de las cepas del tipo capsular A, pero no así con las del tipo capsular D. Se corrobora que en México el tipo capsular predominante de P. multocida es el A.

Mannheimiosis bovina: etiología, prevención y control / Bovine mannheimiosis: etiology, prevention and control

Mannheimia haemolytica (Mh) is the most pathogenic bacteria associated with bovine pneumonic pasteurellosis (mannheimiosis); furthermore, it is the most important economic loss disease in beef cattle, and the second one after gastrointestinal diseases mainly in less than a year old dairy heifers. It is a common and important opportunistic agent in bovine nasopharynx. Stress immunosuppression or the infection caused by respiratory viruses or Mycoplasma spp, lead to its establishment and multiplication in lung tissue. A1 and A6 are the most frequent serotypes in pneumonic injuries, and A1 and A2 in the nasopharynx of healthy bovine. Among the Mh virulence factors, leukotoxin is the most important one; its primarily toxic effect is primarily against leukocytes in ruminants. A better understanding of the epidemiology and the importance of Mh species requires new identification criteria that include molecular techniques, as well as more sensitive procedures regarding biochemical and immunological isolation and identification. Antimicrobial efficacy, as prophylactic or therapeutical agents, has been very variable due to diagnosis inaccuracies and to the increase of multi-resistant strains. There is a varied range of bacterins that have been used over the last decades; the efficacy of many of them has been questioned as they only protect partially and some of them might even increase the morbility. Vaccines with a supernatant culture containing leukotoxin and other soluble antigens, or isolated bacterial extracts or combined with bacterins, have been recently developed showing satisfactory results. Efficient prevention and control of bovine mannheimiosis should be supported by a reliable diagnosis, use of vaccines and efficient therapeutic measurements, together with good management practices.

Mannheimia haemolytica (Mh) es la bacteria más patógena y más comúnmente asociada con la pasteurelosis neumónica (mannheimiosis) bovina, la enfermedad económicamente más importante en bovinos productores de carne, y la segunda, después de las enfermedades grastrointestinales, en becerras lecheras, principalmente menores de un año. Es un habitante normal y un importante agente oportunista de la nasofaringe de bovinos; la inmunosupresión por estrés o la infección por virus respiratorios o por Mycoplasma spp, propician su establecimiento y multiplicación en el tejido pulmonar. El A1 y el A6 son los serotipos más frecuentes en lesiones neumónicas, y el A1 y A2 en nasofaringe de bovinos sanos. Entre los factores de virulencia de Mh, la leucotoxina es el más importante, cuyo efecto tóxico primario es en contra de los leucocitos, particularmente de rumiantes. Para comprender mejor la epidemiología y la importancia de las especies de Mh, se requieren nuevos criterios para su identificación, que incluyan técnicas moleculares y procedimientos más sensibles de aislamiento e identificación bioquímica e inmunológica. La eficacia de los antimicrobianos, como profilácticos o terapéuticos, ha sido muy variable debido a inconsistencias en el diagnóstico y al incremento en la frecuencia de cepas multirresitentes. Existe una amplia gama de bacterinas empleadas durante décadas; sin embargo, la eficacia de muchas de ellas ha sido cuestionada, pues sólo protegen parcialmente, incluso algunas pueden incrementar la morbilidad. Recientemente se han desarrollado vacunas con sobrenadante de cultivo que contienen leucotoxina y otros antígenos solubles, o extractos bacterianos solos o combinados con bacterinas, con resultados muy satisfactorios. La prevención y el control eficaz de la mannheimiosis bovina deben sustentarse en un diagnóstico confiable, vacunas y medidas terapéuticas eficaces, y buenas prácticas de manejo.

Evaluación de la prueba de rivanol para el diagnóstico de brucelosis en caprinos / Evaluation of rivanol test for diagnosis of brucellosis in goats

El objetivo del presente trabajo fue evaluar la prueba de rivanol para el diagnóstico de brucelosis caprina, determinando su sensibilidad y especificidad. La prueba se realizó con antígeno comercial de Brucella abortus, utilizando las diluciones 1:25, 1:50, 1:100, 1:200 y 1:400. Para determinar la sensibilidad se utilizaron 64 sueros de caprinos con infección demostrada por aislamiento de B. melitensis, la especificidad se evaluó con 50 sueros de caprinos procedentes de hatos y de zonas libres de brucelosis. La especificidad en cabras vacunadas se obtuvo usando sueros de 22 cabras jóvenes de 3 a 4 meses de edad vacunadas con dosis clásica (1 x 109 ufc/ml) de Rev 1 B. melitensis por vía subcutánea y 59 cabras adultas vacunadas con dosis reducida (1 x 105 ufc/ml) de Rev 1 por vía subcutánea, a partir de los cuales se colectaron muestras serológicas los días 7, 15, 30, 60, 90, 120, 150, 180 y 210 posvacunación. Del grupo de animales infectados 54 sueros resultaron positivos con títulos que variaron de 1:25 a 1:400, resultando la sensibilidad de 83 por ciento. El grupo de caprinos procedentes de zonas libres de brucelosis no presentó ningún resultado positivo, por lo que la especificidad fue del 100 por ciento. El grupo de cabras jóvenes vacunadas con dosis clásica presentó de los 7 a los 90 días 100 por ciento de reactores; a los 120 y 150 días, 27 por ciento; de los 180 a los 240 días, 9 por ciento. Los sueros de cabras vacunadas con dosis reducida reaccionaron 100 por ciento de los 7 a los 90 días; a los 120 y 150 días, 35 por ciento; a los 180 días, 21 por ciento; y a los 210 y 240 días, 6 por ciento de positivos. Se concluye que la prueba de rivanol no ofrece ninguna ventaja para ser utilizada en el diagnóstico de la brucelosis caprina como prueba confirmatoria.

Prueba de tarjeta modificada para el diagnóstico de la brucelosis caprina / Evaluation of the modified card test for diagnosis to goat brucellosis

El objetivo de este trabajo fue evaluar la sansibilidad y la especificidad de dos antígenos para la prueba de tarjeta utilizadas en el diagnóstico de la brucelosis caprina. Se usó el antígeno rosa de Bengala, que tiene una concentración celular del 8 por ciento y un antígeno experimental preparado a una concentración celular del 3 por ciento. Ambos antígenos se prepararon utilizando la cepa 119.3 de B. abortus, con solución amortiguadora de lactado con pH3.6. La sensibilidad de la prueba de tarjeta con ambos antígenos se determinó usando 53 sueros de caprinos con aislamiento bacteriológico de B. melitensis. Para determinar la especificidad se utilizaron 100 sueros de caprinos negativos a brucelosis, procedentes de zonas libres. La sensibilidad del antígeno rosa de Bengala al 8 por ciento es inadecuado en carpinos debido a su baja sensibilidad, por lo que es recomendable la utilización del antígeno rosa de Bengala preparado a una concentración del 3 por ciento

Epididimitis ovina: estudios bacteriológico y serológico / Ovine epididymytis a Bacteriological and serological studies

La brucelosis en ovinos puede ser causada por Brucella ovis y por brucelas lisas, en ambos casos puede presentarse epididimitis u orquitis, las cuales también se asocian con otros agentes infecciosos como Actinobacillus seminis e histophilus ovis. El objetivo de este trabajo fue aislar e identificar los agentes bacterianos involucrados en la epididimits ovina y establecer la relación en el diagnóstico serológico y bacteriológico de brucelas lisas, de B. ovis Y A. seminis con la presencia de epididimitis clínica. Se trabajó en 6 rebaños ovinos localizados en los estados de México, Hidalgo y el Distrito Federal, se tomaron muestras de suero de 111 machos, y muestras de semen y testículos de 17 carneros. La presencia de epididimitis se determinó por palpación y observación. A los sueros se les aplicó la prueba diagnóstica de tarjeta al 3 por ciento para brucelas lisas, las pruebas de ELISA indirecta e inmunodifusión doble (IDD) con el antígeno proteínico de extracción salina caliente para B. ovis, e IDD con antígeno solubre para A. seminis. Se realizó análisis bacteriológico a las muestras de semen y testículos de machos con epididimitis, a las cepas aisladas se les efectuaron pruebas de identificación bioquímica rutinarias; para A. seminis se realizó además IDD con antígeno obtenido por lisis de cepas aisladas y de referencia. En los 6 rebaños se diagnósticó la presencia de anticuerpos para B. ovis, por IDD, se encontraron 10 positivos (9.0 por ciento), en ELISA indirecta se obtuvieron 25 sueros positivos (22.5 por ciento), para brucelas lisas se encontraron 20 sueros positivos (18.01 por ciento). Para A. seminis se identificaron 10 seros positivos (9.0 por ciento), pertenecientes a 3 de los 6 rebaños muestreados. Se lograron aislar dos cepas de B. ovis a partir de testículos, y de dos cepas de A. seminis de semen

Evaluación de la protección contra la pasteurelosis neumónica, en corderos vacunados con diferentes antígenos de Pasteurella haemolytica A1 / Lamb immunization against pneumonic pasteurellosis using different antigents of Pasteurella haemolytica A1

Con la finalidad de medir la protección contra pasteurelosis pulmonar que otorgan diferentes inmunógenos de Pasteurella haemolytica A1, éstos se evaluaron en 2 etapas: en condiciones de desafío experimental, y de desafío natural. En la primera, 42 corderos fueron distribuidos en 6 grupos: el Grupo A recibió cultivo vivo, el B sirvió como testigo, al C se le trató con una bacterina comercial, el D con leucotoxina (sobrenadante de cultivo), al E se le administró extracto solubre capsular (ESC) con leucotoxina y el F fue tratado con ESC con leucotoxina más adyuvante. En el día 35 los ovinos fueron expuestos al virus de PI3 y 7 días después fueron desafiados con P. haemolytica por vía transtorácica. Los corderos sobrevivientes fueron sacrificados al día 49, para el registro de lesiones y estudio bacteriológico. Se les tomó diariamente la temperatura rectal y muestras de suero cada 7 días, con el fin de medir anticuerpos anticápsula y antilecotoxina. En la evaluación de campo se trabajó con 4 grupos de 80 animales cada uno. Se midieron niveles de anticuerpos y se registraron parámetros de morbilidad y mortalidad. En la primera fase los títulos de anticuerpos anticápsula y antileucotoxina fueron estadísticamente significativos (P<0.05) en los grupos tratados con bacteria viva, leucotoxina y bacteriana comercial en comparación con el resto de los grupos; las lesiones fueron más severas en los grupos B, E y F. En la fase de campo en los grupos 1,2 y 4 se enfermaron la neumonía clínica 3 (3.75 por ciento), 5 (6.25 por ciento) y 4 (5 por ciento) animales, respectivamente, y en el grupo 3 (testigo) fueron 23 (28.75 por ciento). Con respecto a la mortalidad y los niveles de anticuerpos se encontró diferencia (P<0.05) entre los grupos 1 y 3. Los resultados obtenidos en ambas fases sugieren que la leucotoxina (sobrenadante de cultivo) y la bacteria viva pueden ser una opción importante en la prevención de las neumonías en ovinos

Presencia de anticuerpos contra diferentes especies de Brucella en sementales ovinos jóvenes / Presence of antibodies against different Brucella species in young rams

En México se desconoce la distribución de la brucelosis ovina causada tanto por Brucella ovis como por brucelas lisas (B. abortus y B. melitensis); en este sentido el objetivo de este trabajo fue determinar la presencia de anticuerpos contra B. ovis y brucelas lisas, en sementales ovinos jóvenes, de ocho diferentes estados de la República mexicana. Se obtuvieron 622 sueros de ovinos machos, de las razas suffolk, Blakbelly, Hampshire y Pelibuey, de entre seis y 11 meses de edad, pertenecientes a 39 diferentes rebaños. Para el diagnóstico de B. ovis se empleó la prueba de inmunodifusión doble en agar usando como antígeno un extracto salino. Las pruebas utilizadas para la detección de anticuerpos contra brucelas lisas fueron la de tarjeta, con dos diferentes concentraciones celulares del antígeno (3 por ciento y 8 por ciento) y la de fijación de complemento. Los reactores positivos a la prueba de inmunodifusión fueron 15, que representaron 2.4 por ciento; hubo ocho rebaños con animales positivos, esto correspondió al 20.5 por ciento. Respecto de las brucelas lisas el número de reactores a la prueba de tarjeta al 8 por ciento de cc fue de 5 (0.8 por ciento), mientras que con antígeno al 3 por ciento de cc el número de reactores fue de 17 (2.7 por ciento). A la prueba de fijación del complemento presentaron reacción positiva 3 sueros (0.48 por ciento). Los datos obtenidos en el presente estudio ponen de manifiesto que las infecciones causadas tanto por B. ovis como por brucelas lisas, se encuentran presentes en porcentajes que deben tomarse en consideración por lo programas de control de la enfermedad